Introducción
La Citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos: enzimas, metales pesados, sustancias orgánicas moléculas de depósito y otras sustancias.
La Citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos: enzimas, metales pesados, sustancias orgánicas moléculas de depósito y otras sustancias.
Las
técnicas Citoquímicas son un complemento de las tinciones hematológicas, y por
medio de ellas se localizan enzimas y sustancias inorgánicas, mejorando así la
diferenciación celular y en algunos casos también sirven para el diagnóstico de
ciertas leucemias.
Los
componentes celulares que son posibles revelar con el estudio Citoquímico son:
- Enzimas (oxidantes e hidrológicas)
- Glucógeno
- Lípidos
PROCESOS EN LA TÉCNICA CITOQUÍMICA
Las tinciones
Citoquímicas se realizan en frotis de médula ósea o sangre periférica.
1.-
Fijación de la Extensión: Evita el deterioro celular al preservar las
estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para
las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre
los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular.
2.- Incubación en el medio de reacción: Al poner en contacto las células con el medio de reacción se liberan unos productos que, bien por sí mismos o bien combinados con otros, dan lugar a un precipitado apreciable al microscopio óptico.
3.- Tinción de Contraste: Se realiza para facilitar la identificación morfológica de la célula en la que ha se ha producido la reacción ya que permite resaltar en lo posible el producto de reacción y permite una óptima visualización del núcleo y del citoplasma.
2.- Incubación en el medio de reacción: Al poner en contacto las células con el medio de reacción se liberan unos productos que, bien por sí mismos o bien combinados con otros, dan lugar a un precipitado apreciable al microscopio óptico.
3.- Tinción de Contraste: Se realiza para facilitar la identificación morfológica de la célula en la que ha se ha producido la reacción ya que permite resaltar en lo posible el producto de reacción y permite una óptima visualización del núcleo y del citoplasma.
Las
reacciones deben tener 3 características:
- Sensibilidad
- Especificidad
- Reproductibilidad.
En las leucemias
agudas la Citoquímica se realiza sobre muestras extendidas de médula ósea, pues
en ellas existe mayor representación de la población tumoral, pero puede
utilizarse la periferia si el recuento de blastos es elevado.
Las
tinciones Citoquímicas más comunes son:
· Tinción de
Mieloperoxidasa
· Tinción de
Fosfatasa Alcalina Granulocitaria (FAL o FAG)
· Tinción de
Fosfatasa Acida (FAC)
· Negro Sudán
B (lípidos)
· Esterasas
· Tinción del ácido periódico de Schiff (PAS) (glucógeno)
Para la correcta
valoración Citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos.
LAS
REACCIONES CITOQUÍMICAS MÁS COMUNES QUE PUEDES REALIZAR SON:
1)
Reacción de Pas
La
reacción de PAS o del ácido peryódico de Schiff se basa en la rotura de los
enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos por la acción del ácido peryódico,
potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el
reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Identifica al glucógeno en el citoplasma
celular.
La
reacción del PAS ha perdido utilidad en el diagnóstico hematológico después de
la aparición de mejores marcadores. Sigue teniendo interés en la diferenciación
de diferentes tipos de leucemias linfoblásticas, en la eritroleucemia y en
diversas mielodisplasias.
2)
NEGRO B DE SUDÁN
Es
una coloración no enzimática útil en patología mieloide. Tiñe los fosfolípidos
y otros lípidos, colorea los gránulos azurófilos y específicos de los
granulocitos y tiene la ventaja de que con el tiempo no disminuye la actividad.
Los neutrófilos segmentados y sus precursores muestran unos gránulos gruesos en
el citoplasma de color gris muy oscuro.
3)
Peroxidasa
La
demostración Citoquímica de esta enzima se basa en la acción oxidante de la
peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de peróxido de
hidrógeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma
en donde se ha producido la reacción.
La
Mieloperoxidasa se sintetiza en el retículo endoplasmático rugoso, de donde
pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente
en la granulación 1ª o azurófila. Se localiza sobre todo, en los gránulos
primarios de los neutrófilos y precursores, así como en los gránulos de los
eosinófilos y monocitos.
4)
FOSFATASA ALCALINA
La
fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las
fosfomonoesterasas; hidroliza monoésteres del ácido fosfórico, actuando a un pH
de 9,1 a 9,6; ligeros ¯ de pH determinan una rápida inactivación de la enzima.
La demostración Citoquímica se basa en la hidrólisis de ciertos substratos, de
los cuales se liberan unos productos intermedios que combinados con una sal
diazoica dan un precipitado coloreado.
La
actividad de la FA granulocítica se manifiesta en forma de un precipitado pardo
negruzco localizado en el citoplasma. Se encuentra actividad FA en algunas
células maduras y semimaduras de la granulopoyesis neutrófila (bandas y
segmentados).
5)
FOSFATASA ÁCIDA
Es
una enzima hidrológica perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas, que actúa
sobre los ésteres del ácido fosfórico; su pH óptimo de actuación oscila entre
4,7 y 5,5. Se trata de una enzima de ubicación lisosómica.
La
demostración Citoquímica se basa en la hidrólisis del substrato
naftol-AS-Bi-fosfato, liberándose unos productos intermedios que al combinarse
con una sal diazoica dan un precipitado de color rojo anaranjado en el
citoplasma.
6)
ESTERASAS
Son
un grupo de enzimas lisosomales presentes en cantidades variables en muchas
células sanguíneas. Ellas hidrolizan ésteres orgánicos y liberan el alcohol
(naftol), el cual de acopla a una sal diazoica para formar un azocolorante que
se deposita sobre el sitio de actividad enzimática. Existen diferentes
variedades según el substrato empleado.
Se
utilizan 4 substratos: naftol-AS-C-cloroacetato, naftol-AS-D-acetato,
alfa-naftil-acetato, alfa-naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en
presencia de una sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la
reacción.
aqui les mostramos un video donde indica por que medios podemos tomar las muestras para darnos cuenta si se presenta algun tipo de leucemia:
Reflexión sobre el uso de las TIC's
Las tecnologías de la información y la comunicación pueden mejorar la
vida de todos los habitantes del planeta. Estas nos han ayudado a mejorar
nuestro entorno de vida. En el medio clínico nos ha ayudado a poder identificar más preciso
los resultados de las tinciones cito químicas y tener un mejor servicio al
paciente.
links:
http://www.slideshare.net/raulset/tinciones-citoquimicas
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Hola jóvenes muy bien su resumen y completo.
ResponderEliminarSonia
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